Plásmido Doble Nickase (h) UBE1L2: sc-412489-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)UBE1L2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa UBE1L2 (h) y el plásmido de doble nickasa UBE1L2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a UBA6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) UBE1L2 | sc-412489-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) UBE1L2 | sc-412489-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBA6 codifica la enzima E1 activadora de ubiquitina UBE1L2, que inicia la conjugación de ubiquitina y de modificadores tipo ubiquitina al adenilar la ubiquitina y transferirla a enzimas E2 para apoyar la modificación posterior de sustratos mediada por ligasas E3. Esta actividad ayuda a coordinar la proteostasis dependiente de ubiquitina, el control de calidad proteico y el recambio regulado de factores de señalización, influyendo así en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la señalización inmunitaria innata. UBA6 también se asocia con la vía FAT10/UBD mediante la activación de modificadores tipo ubiquitina que modulan el procesamiento de antígenos y la señalización inflamatoria. La desregulación de las cascadas de activación y conjugación de ubiquitina es ampliamente relevante para los mecanismos que subyacen a la neurodegeneración, la reprogramación de la señalización asociada al cáncer y la biología de las enfermedades inflamatorias, lo que convierte a UBA6 en una diana útil para desentrañar dependencias de la vía de la ubiquitina.
UBE1L2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UBA6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UBA6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UBA6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UBA6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.