UBC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418924

Descripción general

El gen Ubc de ratón codifica la poliubiquitina-C (UBC), una fuente principal de monómeros de ubiquitina necesarios para el recambio proteico dependiente de ATP a través del sistema ubiquitina–proteasoma. UBC respalda la regulación de la progresión del ciclo celular impulsada por la ubiquitinación, las respuestas al daño del ADN, la adaptación al estrés y la señalización inflamatoria al controlar la estabilidad y la actividad de componentes clave de estas vías. Dado que la homeostasis de la ubiquitina amortigua el estrés proteotóxico y modula la salida de las señales, con frecuencia se estudian el suministro alterado de ubiquitina y el desequilibrio de la proteostasis en modelos de neurodegeneración, control del crecimiento relevante para el cáncer y desregulación inmunitaria. Por ello, Ubc se utiliza habitualmente para investigar el control de calidad dependiente del proteasoma, la dinámica de las cadenas de ubiquitina y la interrelación con la autofagia y las vías de respuesta al estrés en células de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBC (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ubc en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ubc junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ubc tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ubc para la investigación de la señalización de UBC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ubc críticos para la función de UBC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ubc para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBC CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UBC CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ubc. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBC (m) y el plásmido HDR UBC (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ubc para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ubc definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.