Plásmido Doble Nickase (m) U2AF65: sc-423572-NIC

U2af2 codifica la proteína murina U2AF65, un factor esencial de empalme (splicing) con capacidad de unión a ARN que reconoce el tracto polipirimidínico en los sitios de empalme 3′ y ayuda a reclutar el snRNP U2 durante las etapas tempranas del ensamblaje del espliceosoma. A través de sus motivos de reconocimiento de ARN y de sus interacciones con U2AF35 y SF1, U2AF65 coordina la definición de exones y las decisiones de empalme alternativo que determinan la salida de isoformas de transcritos en numerosas vías de señalización y del ciclo celular. La alteración del empalme dependiente de U2AF65 puede modificar la maduración del ARNm, su exportación nuclear y la composición del proteoma, lo que convierte a U2af2 en un nodo clave para estudiar la fidelidad del procesamiento de ARN. Los programas de empalme desregulados y el desequilibrio de factores del espliceosoma están ampliamente implicados en la biología de tumores hematológicos y sólidos, así como en mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, lo que respalda el uso de modelos de U2af2 para explorar redes de empalme relevantes para la enfermedad.

U2AF65 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus U2af2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de U2af2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de U2af2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con U2af2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.