Plasmide Double Nickase (m) Tyrosinase: sc-423566-NIC

Le gène Tyr de la souris code la tyrosinase, une oxydase dépendante du cuivre qui catalyse des étapes clés limitantes de la biosynthèse de la mélanine, notamment la conversion de la L-tyrosine en DOPA puis en DOPAquinone au sein des mélanosomes. L’activité de la tyrosinase s’intègre aux programmes de différenciation des mélanocytes et aux voies de biogenèse des organites qui régissent la production, le trafic et le stockage des pigments. La perturbation de Tyr dérègle la synthèse de l’eumélanine et de la phéomélanine, modifiant les phénotypes de pigmentation largement utilisés comme lectures faciles et robustes en biologie du développement et en biologie cellulaire. Comme les gènes de la voie de la mélanine influencent la chimie oxydative et les réponses cellulaires au stress, Tyr est fréquemment étudié dans des modèles de variation pigmentaire et de troubles génétiques associés.

Tyrosinase Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tyr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tyr. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tyr. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tyr.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.