Plasmide Double Nickase (h) Type I 5-phosphatase: sc-410836-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Type I 5-phosphatase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Type I 5-phosphatase Double Nickase (h) et le plasmide Type I 5-phosphatase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant INPP5A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Type I 5-phosphatase | sc-410836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Type I 5-phosphatase | sc-410836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP5A code une 5‑phosphatase de type I des polyphosphates d’inositol, une enzyme cytosolique qui hydrolyse le phosphate en position 5 de l’inositol 1,4,5‑trisphosphate (IP3) et de phosphates d’inositol apparentés afin de mettre fin à la signalisation de second messager. En limitant la mobilisation du calcium dépendante de l’IP3 à partir du réticulum endoplasmique, INPP5A module des processus régulés par le Ca2+ tels que la sécrétion, l’excitabilité et les réponses transcriptionnelles dépendantes de l’activité. Ce renouvellement des phosphoinositides/phosphates d’inositol s’articule avec la signalisation liée à PI3K et, plus largement, avec le contrôle homéostatique des réponses cellulaires au stress. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’INPP5A ont été impliquées dans une dérégulation de la signalisation calcique et sont étudiées dans le contexte de la neurobiologie et du remodelage des voies de signalisation associé au cancer.
Type I 5-phosphatase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INPP5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INPP5A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INPP5A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INPP5A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.