Type I 4-phosphatase Double Nickase Plasmid (h): sc-404750-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Type I 4-phosphatase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Type I 4-phosphatase Double-Nickase-Plasmid (h) und Type I 4-phosphatase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf INPP4A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Type I 4-phosphatase: sc-390549
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Type I 4-phosphatase Double Nickase Plasmid (h) | sc-404750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Type I 4-phosphatase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP4A kodiert die Typ‑I‑4‑Phosphatase, eine Inositolpolyphosphat‑4‑Phosphatase, die Phosphatidylinositol‑3,4‑bisphosphat zu Phosphatidylinositol‑3‑phosphat hydrolysiert und dadurch die Phosphoinositid‑Pools der Membran umgestaltet. Über diese Aktivität moduliert es die Dynamik PI3K‑abhängiger Signalwege und beeinflusst die Rekrutierung von PH‑Domänen‑Effektoren, die Identität endosomaler Membranen sowie die nachgeschaltete Kontrolle von Programmen für Zellwachstum und ‑überleben. Die Funktion von INPP4A überschneidet sich mit rezeptorvermittelter Signalübertragung und Prozessen des vesikulären Transports, die Nährstoffsensorik und Stressantworten koordinieren. Eine veränderte Regulation von INPP4A und des Umsatzes von PI(3,4)P2 wurde in der Literatur mit fehlregulierten Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und Neurobiologie relevant sind, und stützt mechanistische Studien zur Umverdrahtung von Signalwegen.
Type I 4-phosphatase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des INPP4A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von INPP4A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die INPP4A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit INPP4A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.