Twinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404159

概要

TWNKは、mtDNA（ミトコンドリアDNA）の複製に必須のミトコンドリアDNAヘリカーゼであるTwinkleをコードしており、mtDNA複製およびヌクレオイドの維持に重要な役割を担う。Twinkleはミトコンドリアのレプリソームと協調して機能し、酸化的リン酸化能を支える。複製時に二本鎖mtDNAを巻き戻すことで、TwinkleはmtDNAコピー数とゲノム完全性の保持に寄与し、ミトコンドリア転写、呼吸鎖の生合成、ならびに細胞のエネルギー恒常性に影響を与える。TWNKの機能撹乱は、mtDNA枯渇や多重欠失を含むミトコンドリアゲノム不安定性と関連し、神経筋および神経変性を伴うミトコンドリア疾患の表現型と結び付けられている。そのため、TWNKの機能喪失研究は、ミトコンドリアストレスシグナル伝達、バイオエネルギーのリモデリング、ならびに複製関連mtDNA損傷応答の解明に有用である。

Twinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTWNK遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TWNK内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TWNKのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Twinkleタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Twinkleシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TWNK欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Twinkleの機能に不可欠なTWNKエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TWNKゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Twinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTwinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TWNK遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Twinkle HDRプラスミド（h）および Twinkle HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTWNKホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTWNK標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。