TWIK-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407263

Übersicht

KCNK6 kodiert TWIK-2 (K2P6.1), einen Kaliumkanal mit Zwei-Poren-Domäne, der zur Hintergrund- („Leak“-) K+-Leitfähigkeit beiträgt und dabei hilft, das Ruhemembranpotenzial sowie die Membranerregbarkeit festzulegen. Die Aktivität von TWIK-2 beeinflusst die Ionenhomöostase und calciumabhängige Signalwege, indem sie die zelluläre Polarisierung mitprägt; beschrieben sind Rollen in der Funktion vaskulärer glatter Muskelzellen, in der Endothelbiologie und in der Aktivierung von Immunzellen. Über seinen Einfluss auf elektrische Eigenschaften und nachgeschaltete Signalübertragung wurde TWIK-2 in Signalwegen untersucht, die mit der Regulation des Gefäßtonus und mit Entzündungsreaktionen in Verbindung stehen. Eine dysregulierte Funktion von K2P-Kanälen, einschließlich TWIK-2, ist daher für mechanistische Untersuchungen von Hypertonie, vaskulärer Dysfunktion und immunvermittelter Pathophysiologie relevant.

Das TWIK-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNK6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNK6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNK6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TWIK-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNK6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TWIK-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNK6-Exone abzielen, die für die TWIK-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNK6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TWIK-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TWIK-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNK6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TWIK-2 HDR-Plasmid (h) und TWIK-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNK6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNK6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.