Plasmide CRISPR d'Activation (h) TTYH1: sc-408039-ACT

TTYH1 (membre 1 de la famille tweety) code une protéine membranaire à passages multiples, enrichie dans le système nerveux, et impliquée dans la régulation de l’homéostasie ionique, de l’excitabilité membranaire et de la dynamique du volume cellulaire. TTYH1 a été associé à des processus tels que la signalisation activée par le calcium, des réponses liées à la conductance des chlorures et le remodelage du cytosquelette, qui influencent la migration et la croissance des neurites. Dans des modèles cellulaires, une expression modifiée de TTYH1 peut affecter la prolifération et le comportement invasif, ce qui concorde avec des associations rapportées avec la biologie du neurodéveloppement et des programmes transcriptionnels liés aux tumeurs cérébrales. Ces caractéristiques font de TTYH1 un nœud pertinent pour l’étude de la signalisation associée à la membrane et des voies d’adaptation au microenvironnement dans les cellules humaines.

TTYH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TTYH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TTYH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TTYH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TTYH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TTYH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TTYH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TTYH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TTYH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TTYH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.