Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPO2 (h): sc-406342

Présentation

TSPO2 (protéine translocatrice 2) est un membre de la famille TSPO associé aux mitochondries, exprimé principalement dans les cellules de la lignée érythroïde, où il soutient l’érythropoïèse terminale et la maturation des globules rouges. Il a été impliqué dans la régulation de l’organisation de la membrane mitochondriale ainsi que dans la gestion des métabolites et des porphyrines, reliant l’activité de TSPO2 à la synthèse de l’hème et aux programmes de différenciation érythroïde. Par ces processus, TSPO2 influence l’équilibre rédox cellulaire et la fonction mitochondriale lors du remodelage des réticulocytes. Des altérations de l’expression ou de la fonction de TSPO2 ont été étudiées dans le contexte de troubles érythroïdes et de phénotypes liés à l’anémie, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques dans les systèmes hématopoïétiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPO2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TSPO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TSPO2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TSPO2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSPO2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TSPO2 pour l'étude de la signalisation de TSPO2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TSPO2 essentiels à la fonction de TSPO2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TSPO2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSPO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TSPO2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TSPO2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSPO2 plasmide HDR (h) et le TSPO2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TSPO2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TSPO2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.