TSGA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423525

Descripción general

Rsph1 codifica un componente de la cabeza de los radios radiales necesario para una arquitectura axonemal adecuada y para el batido coordinado de cilios y flagelos, lo que respalda la ciliogénesis motora y el transporte basado en microtúbulos en epitelios multiciliados. A través de su papel en el axonema 9+2, RSPH1 contribuye a vías que regulan la depuración mucociliar y la motilidad espermática, vinculando su función con la homeostasis de las vías respiratorias y la biología reproductiva. La alteración de proteínas de los radios radiales se asocia con fenotipos de discinesia ciliar primaria, incluidos enfermedad respiratoria crónica y defectos de lateralidad, lo que convierte a Rsph1 en un locus útil para estudiar procesos del desarrollo e inflamatorios impulsados por los cilios. En modelos murinos, la perturbación de Rsph1 permite la investigación mecanística de las relaciones estructura–función de los cilios móviles en tejidos respiratorios y reproductivos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TSGA2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rsph1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rsph1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rsph1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TSGA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rsph1 para la investigación de la señalización de TSGA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rsph1 críticos para la función de TSGA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rsph1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TSGA2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TSGA2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rsph1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TSGA2 (m) y el plásmido HDR TSGA2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rsph1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rsph1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.