Plásmido Doble Nickase (h) tsg 101: sc-400290-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)tsg 101 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa tsg 101 (h) y el plásmido de doble nickasa tsg 101 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TSG101. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: tsg 101 Anticuerpo (C-2): sc-7964
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) tsg 101 | sc-400290-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) tsg 101 | sc-400290-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSG101 codifica el gen de susceptibilidad tumoral 101 (tsg101), un componente central del complejo ESCRT-I que coordina la clasificación endosomal y la biogénesis de cuerpos multivesiculares para regular la disminución de receptores y el recambio de proteínas de membrana. A través de la escisión de membrana dependiente de ESCRT, TSG101 también contribuye a la abscisión durante la citocinesis, la formación de exosomas y la gemación de virus envueltos, lo que lo vincula a vías de tráfico vesicular y remodelado de membranas. Su actividad se relaciona con el reconocimiento de carga dependiente de ubiquitina y la atenuación de señales, influyendo en la dinámica de los receptores de factores de crecimiento y en la proteostasis. La desregulación de TSG101 se ha asociado con alteraciones del tráfico endolisosomal y con estados de señalización aberrantes observados en diversos cánceres y modelos relacionados con infecciones, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis celular.
tsg 101 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TSG101 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TSG101. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TSG101. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TSG101 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.