TS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423565

Übersicht

Tyms kodiert die Thymidylat-Synthase (TS), ein zentrales folatabhängiges Enzym, das die Umwandlung von dUMP zu dTMP katalysiert und damit die Thymidin-Nukleotidpools aufrechterhält, die für DNA-Replikation und -Reparatur erforderlich sind. Die TS-Aktivität verknüpft den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel über das Netzwerk der de-novo-Pyrimidinbiosynthese mit der Progression durch die S-Phase, der Genomstabilität sowie der Synthese mitochondrialer und nukleärer DNA. In Mausmodellen werden die Regulation von Tyms und die TS-Menge häufig in proliferativen Geweben und schnell teilenden Zellmodellen untersucht, in denen ein Ungleichgewicht der Nukleotide Replikationsstress und DNA-Schadenssignalisierung auslösen kann. Eine fehlregulierte, TS-assoziierte metabolische Flussrate ist relevant für Mechanismen veränderter Zellzykluskontrolle und genomischer Instabilität, die in der Krebsbiologie und der Forschung zu Folat-Stoffwechselwegen häufig untersucht werden.

Das TS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tyms-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tyms-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tyms nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tyms-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tyms-Exone abzielen, die für die TS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tyms-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tyms-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TS HDR-Plasmid (m) und TS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tyms-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tyms-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.