Trx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423563
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Trx Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Trx-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Trx: sc-271281
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Trx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423563 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Txn1-Gen kodiert Thioredoxin (Trx), eine konservierte Oxidoreduktase, die die zelluläre Redoxhomöostase aufrechterhält, indem sie die Reduktion von Disulfidbrücken in Zielproteinen katalysiert. Trx wirkt im Thioredoxin-System zusammen mit Thioredoxin-Reduktase und NADPH, um redoxempfindliche Signalwege, darunter MAPK- und NF-κB-Signalwege, zu regulieren und reaktive Sauerstoffspezies abzufangen, die während des Stoffwechsels und bei Entzündungen entstehen. Durch die Kontrolle der Proteinfaltung, die Unterstützung der DNA-Synthese über die Ribonukleotidreduktase sowie die Modulation von Apoptose und Autophagie trägt Txn1 umfassend zur Anpassung an zellulären Stress bei. Eine fehlregulierte Thioredoxin-Aktivität ist häufig mit oxidativem Stress und entsprechenden Phänotypen verbunden, die für Neurodegeneration, metabolische Dysfunktion und entzündliche Pathologien relevant sind, wodurch Txn1 einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien redoxgetriebener Krankheitsprozesse darstellt.
Das Trx CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Txn1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Txn1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Txn1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Trx-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Txn1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Trx-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Txn1-Exone abzielen, die für die Trx-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Txn1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Trx CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Trx CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Txn1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Trx HDR-Plasmid (m) und Trx HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Txn1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Txn1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.