Plásmido CRISPR de Activación (h) TRPV6: sc-402632-ACT

TRPV6 codifica un canal epitelial de la familia TRP vaniloide altamente selectivo para Ca²⁺ que media la entrada de calcio a través de la membrana plasmática. Al regular la señalización citosólica de Ca²⁺, TRPV6 influye en programas transcripcionales dependientes de calcio, el transporte epitelial y la diferenciación celular. La actividad de TRPV6 se integra con vías situadas aguas abajo del influjo de calcio, incluida la señalización dependiente de calmodulina y redes más amplias de homeostasis iónica. La desregulación de la expresión de TRPV6 y las alteraciones en el manejo del calcio se han asociado con la fisiopatología epitelial y fenotipos relacionados con el cáncer, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de proliferación, invasión y señalización regulada por hormonas.

TRPV6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPV6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRPV6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPV6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPV6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRPV6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPV6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRPV6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRPV6 en células tumorales con expresión de TRPV6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.