TRPV6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402632-ACT

TRPV6 kodiert einen hoch Ca²⁺-selektiven epithelialen Kanal aus der TRP-Vanilloid-Familie, der den Calciumeinstrom über die Plasmamembran vermittelt. Durch die Regulation der zytosolischen Ca²⁺-Signalübertragung beeinflusst TRPV6 calciumabhängige Transkriptionsprogramme, den epithelialen Transport und die zelluläre Differenzierung. Die TRPV6-Aktivität ist mit nachgeschalteten Signalwegen des Calciumeinstroms verknüpft, darunter calmodulinabhängige Signalgebung und umfassendere Netzwerke der Ionenhomöostase. Eine dysregulierte TRPV6-Expression und eine veränderte Calciumhandhabung wurden mit epithelialer Pathophysiologie und krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zu Proliferation, Invasion und hormonregulierter Signalübertragung unterstützt.

TRPV6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRPV6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRPV6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRPV6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRPV6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRPV6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRPV6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRPV6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRPV6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRPV6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.