Plásmido Doble Nickase (h) TRPC1: sc-401040-NIC

TRPC1 (miembro 1 de la subfamilia C de los canales catiónicos de potencial receptor transitorio) codifica un canal catiónico de la membrana plasmática que contribuye a la entrada de Ca2+ operada por receptor y operada por vaciamiento de depósitos, modulando la dinámica del Ca2+ citosólico y la señalización downstream. La afluencia de Ca2+ dependiente de TRPC1 se integra con la señalización PLC/IP3, el acoplamiento STIM/ORAI y vías reguladas por Ca2+ como MAPK y NFAT para influir en la proliferación, migración y diferenciación celular. En células humanas, los cambios en la actividad y los patrones de expresión de TRPC1 se han asociado con una homeostasis del calcio alterada observada en el remodelado cardiovascular, procesos neuropáticos y fenotipos de señalización relacionados con el cáncer, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la función de canales iónicos y la transcripción dependiente de calcio.

TRPC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRPC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRPC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRPC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRPC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.