Plásmido CRISPR de Activación (h) TRPC1: sc-401040-ACT

TRPC1 codifica una subunidad canónica de canal de potencial receptor transitorio que contribuye a la entrada de Ca²⁺ operada por receptor y operada por depósito, configurando señales de calcio citosólico que regulan la proliferación, la migración, la secreción y la remodelación del citoesqueleto. La actividad de TRPC1 se integra con la señalización PLC/IP₃ y con efectores dependientes de calcio como la calmodulina y calcineurina/NFAT para modular programas transcripcionales y metabólicos. La alteración de la expresión de TRPC1 o de la función del canal se ha asociado con una homeostasis del calcio desregulada observada en fenotipos celulares de tipo cardiovascular, neuromuscular y relacionados con el cáncer. Como proteína de membrana ampliamente expresada, TRPC1 se estudia con frecuencia en modelos de mecanosensación, respuestas al estrés oxidativo y procesos vinculados a la transición epitelio-mesenquimal.

TRPC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRPC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRPC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRPC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRPC1 en células tumorales con expresión de TRPC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.