Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin T-C (h): sc-400949

Présentation

TNNT2 code la troponine T cardiaque, un composant central du complexe de la troponine qui couple la signalisation du Ca²⁺ à la régulation, au niveau des filaments fins, de l’interaction actine–myosine dans le muscle strié. En ancrant le complexe de la troponine à la tropomyosine, TNNT2 contribue à coordonner la dynamique de contraction du sarcomère, l’organisation myofibrillaire et le couplage excitation–contraction au sein des cardiomyocytes. Les variations génétiques ou une expression dysrégulée de TNNT2 sont associées à des cardiomyopathies héréditaires et à des dysfonctions contractiles, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire clé pour étudier la biologie sarcomérique, les réseaux de gestion du calcium et les voies de réponse au stress dans les cellules cardiaques humaines. TNNT2 est donc largement utilisé comme nœud fonctionnel pour modéliser le remodelage associé aux maladies, évaluer la sensibilité des myofilaments et servir de référence pour apprécier la maturation des cardiomyocytes in vitro.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin T-C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNNT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNNT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNNT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin T-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNNT2 pour l'étude de la signalisation de Troponin T-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TNNT2 essentiels à la fonction de Troponin T-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNNT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin T-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Troponin T-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNNT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin T-C plasmide HDR (h) et le Troponin T-C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNNT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNNT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.