Troponin T-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400949

Panoramica

TNNT2 codifica la troponina T cardiaca, una componente fondamentale del complesso della troponina che collega la segnalazione del Ca²⁺ alla regolazione, a livello dei filamenti sottili, dell’interazione actina–miosina nel muscolo striato. Ancorando il complesso della troponina alla tropomiosina, TNNT2 contribuisce a coordinare la dinamica di contrazione del sarcomero, l’organizzazione miofibrillare e l’accoppiamento eccitazione–contrazione all’interno dei cardiomiociti. Variazioni genetiche o un’espressione deregolata di TNNT2 sono associate a cardiomiopatie ereditarie e a disfunzione contrattile, rendendolo un punto di accesso molecolare chiave per studiare la biologia sarcomerica, le reti di gestione del calcio e le vie di risposta allo stress nelle cellule cardiache umane. TNNT2 è quindi ampiamente utilizzato come nodo funzionale per modellare il rimodellamento associato alla malattia, valutare la sensibilità dei miofilamenti e standardizzare la maturazione dei cardiomiociti in vitro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin T-C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNNT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNNT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNNT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Troponin T-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNNT2 per lo studio della segnalazione di Troponin T-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNNT2 critici per la funzione di Troponin T-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNNT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Troponin T-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Troponin T-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNNT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Troponin T-C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Troponin T-C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNNT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNNT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.