Troponin I-FS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423458

Descripción general

Tnni2 codifica la troponina I del músculo esquelético rápido (Troponina I-FS), la subunidad inhibidora del complejo de troponina que acopla las señales de Ca²⁺ al ciclo de puentes cruzados actina–miosina durante la contracción. Al regular la activación del filamento delgado mediante interacciones con la troponina T, la troponina C y la tropomiosina, la Troponina I-FS ayuda a establecer la cinética de contracción, la relajación y la producción de fuerza en las miofibras de contracción rápida. Este gen es fundamental para el acoplamiento excitación–contracción dependiente de calcio y la organización del sarcómero, por lo que es relevante para estudios del desarrollo muscular, la especificación del tipo de fibra y la remodelación dependiente de la actividad. La alteración de la regulación de la troponina se asocia con miopatías esqueléticas y disfunción contráctil, y la perturbación de Tnni2 proporciona un modelo manejable para diseccionar los mecanismos sarcoméricos subyacentes a fenotipos de debilidad muscular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnni2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnni2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnni2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Troponin I-FS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnni2 para la investigación de la señalización de Troponin I-FS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnni2 críticos para la función de Troponin I-FS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnni2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Troponin I-FS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnni2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Troponin I-FS (m) y el plásmido HDR Troponin I-FS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnni2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnni2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.