Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (m): sc-423458

Présentation

Tnni2 code la troponine I du muscle squelettique rapide (Troponine I-FS), la sous-unité inhibitrice du complexe troponine qui couple les signaux Ca²⁺ au cycle des ponts actine–myosine lors de la contraction. En régulant l’activation des filaments fins via des interactions avec la troponine T, la troponine C et la tropomyosine, la Troponine I-FS contribue à déterminer la cinétique de contraction, la relaxation et la production de force dans les myofibres à contraction rapide. Ce gène est essentiel au couplage excitation–contraction dépendant du calcium et à l’organisation du sarcomère, ce qui le rend pertinent pour l’étude du développement musculaire, de la spécification des types de fibres et du remodelage dépendant de l’activité. Une régulation altérée de la troponine est associée à des myopathies squelettiques et à une dysfonction contractile, et la perturbation de Tnni2 constitue un modèle exploitable pour disséquer les mécanismes sarcomériques sous-jacents aux phénotypes de faiblesse musculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnni2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnni2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnni2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin I-FS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnni2 pour l'étude de la signalisation de Troponin I-FS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnni2 essentiels à la fonction de Troponin I-FS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnni2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin I-FS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Troponin I-FS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnni2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin I-FS plasmide HDR (m) et le Troponin I-FS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnni2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnni2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.