TRM61 Double Nickase Plasmid (h): sc-408677-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRM61 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRM61 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRM61 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRMT61A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRM61: sc-81062
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRM61 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408677-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRM61 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408677-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **TRMT61A** kodiert **TRM61**, eine katalytische Untereinheit des tRNA‑m1A58‑Methyltransferase‑Komplexes, der in Initiator‑ und Elongator‑tRNAs an Position 58 **N1‑Methyladenosin (m1A)** einfügt. Diese Modifikation unterstützt die strukturelle Stabilität der tRNA, die korrekte Aminoacylierung und eine präzise Translation und verknüpft die TRM61‑Aktivität damit mit der RNA‑Prozessierung, der Proteostase und zellulären Stressantworten. Störungen von tRNA‑Modifikationswegen können die globale Kontrolle der Translation beeinträchtigen und wurden in Modellsystemen mit Wachstumsdefekten sowie einer veränderten Empfindlichkeit gegenüber metabolischem und proteotoxischem Stress in Verbindung gebracht. TRMT61A wird daher im Kontext der epitranskriptomischen Regulation von tRNAs, der ribosomenassoziierten Qualitätskontrolle und krankheitsrelevanter Mechanismen untersucht, die mit einer dysregulierten Proteinsynthese zusammenhängen.
TRM61 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRMT61A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRMT61A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRMT61A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRMT61A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.