TRIM10 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422691

Descripción general

TRIM10 (Trim10) en el ratón codifica una ligasa E3 de ubiquitina con motivo tripartito, implicada en el control dependiente de ubiquitina de la estabilidad de las proteínas y del recambio de complejos de señalización. Las proteínas de la familia TRIM suelen participar en la regulación de la señalización inmunitaria innata, las respuestas al estrés y procesos asociados al citoesqueleto o a la diferenciación mediante la modulación de la ubiquitinación y la proteostasis. En contextos hematopoyéticos, las proteínas TRIM se vinculan con frecuencia a programas de compromiso de linaje y maduración, lo que hace que Trim10 sea de interés para estudiar redes reguladoras asociadas a la eritropoyesis y, de forma más amplia, la biología de las células inmunitarias. La actividad desregulada de la vía de ubiquitina es una característica recurrente de los mecanismos de enfermedades inflamatorias y hematológicas, lo que respalda el uso de la perturbación de Trim10 para investigar dependencias de la vía en modelos murinos relevantes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRIM10 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trim10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trim10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trim10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRIM10.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trim10 para la investigación de la señalización de TRIM10, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Trim10 críticos para la función de TRIM10
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trim10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRIM10 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRIM10 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trim10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRIM10 (m) y el plásmido HDR TRIM10 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trim10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trim10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.