TRB-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403132-ACT

O TRIB2 humano (TRB-2) codifica uma pseudocinase que atua como adaptador/andaime regulando a transdução de sinal, em vez de catalisar a fosforilação. O TRB-2 modula programas associados a MAPK/ERK e PI3K/AKT e interage com o controle ubiquitina–proteassoma de fatores de transcrição, como proteínas da família C/EBP, moldando processos de diferenciação, proliferação e respostas ao estresse. A expressão alterada de TRIB2 tem sido associada à desregulação da diferenciação hematopoética e mieloide e é frequentemente estudada em biologia do câncer, onde contribui para dependências de sinalização oncogênica. Essas propriedades fazem do TRIB2 um nó útil para dissecar o crosstalk entre vias que controlam decisões de destino celular e a sobrevivência sob estresse.

TRB-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRB-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRB-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRB-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRB-2 em células tumorais com expressão de TRIB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.