Plásmido CRISPR de Activación (h) TRB-1: sc-405781-ACT

La TRIB1 (TRB-1) humana es una seudocinasa catalíticamente inactiva que funciona como andamio regulando la transducción de señales y el recambio de proteínas, en particular mediante interacciones con módulos MAPK y ligasas de ubiquitina como COP1. Al modular las salidas de señalización dependientes de la fosforilación y la estabilidad de reguladores transcripcionales clave, TRIB1 influye en la proliferación celular, la diferenciación y los programas de respuesta al estrés. Las redes dependientes de TRIB1 están implicadas en la regulación inmunitaria e inflamatoria y en la homeostasis del metabolismo lipídico, y la expresión desregulada se ha asociado con la biología de neoplasias hematológicas y con rasgos de enfermedad cardiometabólica. Estas características hacen de TRIB1 una diana útil para desentrañar el cableado de las vías y el control del estado transcripcional en modelos celulares humanos.

TRB-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRIB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRB-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRIB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRIB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRB-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRIB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRB-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRB-1 en células tumorales con expresión de TRIB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.