Trap1a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423500

Descripción general

Trap1a codifica una chaperona mitocondrial de la familia HSP90 que sostiene la proteostasis al estabilizar y plegar proteínas cliente dentro del orgánulo. Trap1a influye en la respiración mitocondrial, la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno y la señalización adaptativa al estrés, integrándose con vías que regulan la apoptosis y la reprogramación metabólica. Al modular la eficiencia de la fosforilación oxidativa y el control de calidad mitocondrial, Trap1a contribuye a las respuestas celulares a la hipoxia, la limitación de nutrientes y el estrés proteotóxico. La actividad desregulada de TRAP1 se ha vinculado con alteraciones en la bioenergética y la tolerancia al estrés observadas en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, incluidos la neurodegeneración y fenotipos metabólicos asociados a tumores, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Trap1a (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trap1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trap1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trap1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Trap1a.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trap1a para la investigación de la señalización de Trap1a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Trap1a críticos para la función de Trap1a
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trap1a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Trap1a CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Trap1a CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trap1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Trap1a (m) y el plásmido HDR Trap1a (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trap1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trap1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.