Plásmido Doble Nickase (h) TRAP: sc-400892-NIC

ACP5 codifica la fosfatasa ácida resistente al tartrato (TRAP), una metaloenzima enriquecida en osteoclastos y macrófagos activados que hidroliza ésteres fosfato en compartimentos ácidos. TRAP contribuye a la remodelación de la matriz ósea, al tráfico vesicular y a procesos relacionados con el estado redox mediante la desfosforilación de sustratos extracelulares y endosomales, en concordancia con los programas de diferenciación de osteoclastos situados aguas abajo de la señalización RANKL–NF-κB y MAPK. La actividad alterada de ACP5/TRAP se asocia con un recambio óseo desregulado y fenotipos inflamatorios, y se estudia con frecuencia en el contexto de los mecanismos de enfermedades osteolíticas y de los estados de activación de células inmunitarias. En modelos celulares humanos, ACP5 sirve como marcador funcional y nodo mecanístico para investigar la osteoclastogénesis, la biología lisosomal y las vías de polarización de macrófagos.

TRAP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACP5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACP5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACP5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACP5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.