TRAP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402963-ACT

Das humane Gen **TGFBRAP1** kodiert **TRAP-1**, einen akzessorischen Faktor, der an der Signalübertragung des Transforming-Growth-Factor-β-(TGF‑β)-Rezeptors sowie an intrazellulären Transportprozessen beteiligt ist, die die Rezeptorreifung, -stabilität und die Weiterleitung nachgeschalteter Signalwege beeinflussen. Durch die Modulation der Effizienz und des Kontexts **SMAD**-abhängiger Transkriptionsprogramme kann TRAP-1 zelluläre Ergebnisse wie die Kontrolle der Proliferation, Differenzierung, den Umbau der extrazellulären Matrix und immunbezogene Signalweg-Kreuzkommunikation beeinflussen. Störungen der Dynamik des TGF‑β-Signalwegs stehen breit mit Fibrose, krebsassoziierter Neuverdrahtung von Signalwegen und der Biologie entzündlicher Erkrankungen in Verbindung, was TRAP-1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen der Feinabstimmung des Signalwegs macht. Die Expression und funktionelle Analyse von **TGFBRAP1** unterstützt die Forschung zur Architektur der Signaltransduktion, zu rezeptorassoziierten Komplexen und zu kontextabhängigen Transkriptionsantworten.

TRAP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TGFBRAP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRAP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TGFBRAP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TGFBRAP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRAP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TGFBRAP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRAP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRAP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TGFBRAP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.