Plásmido Doble Nickase (m) Transketolase: sc-423410-NIC

El gen **Tkt** de ratón codifica la **transcetolasa**, una enzima dependiente de **pirofosfato de tiamina** que cataliza reacciones reversibles de transferencia de **dos carbonos** en la rama **no oxidativa** de la vía de las **pentosas fosfato**. Al interconvertir fosfatos de azúcares como **xilulosa-5-fosfato**, **ribosa-5-fosfato** y **fructosa-6-fosfato**, la transcetolasa conecta la biosíntesis de nucleótidos con el flujo glucolítico y contribuye indirectamente al equilibrio redox celular mediante su coordinación con la actividad oxidativa de la VPP. Por ello, la función de **Tkt** es relevante para el metabolismo proliferativo, el mantenimiento de sistemas antioxidantes dependientes de **NADPH** y las demandas anabólicas en células de rápida división. La desregulación de enzimas de la VPP, incluida la transcetolasa, se ha asociado con alteraciones de la homeostasis metabólica y fenotipos de estrés oxidativo ampliamente estudiados en contextos de investigación metabólica y de neurodegeneración.

Transketolase El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tkt en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tkt. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tkt. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tkt alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.