transferrin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400871-ACT

O gene TF humano codifica a transferrina, uma glicoproteína secretada que se liga ao ferro férrico no plasma e o entrega às células por meio de endocitose mediada pelo receptor de transferrina, sustentando a respiração mitocondrial, a síntese de DNA e a progressão do ciclo celular. O tráfego de ferro dependente de transferrina integra-se aos programas de homeostase do ferro governados pela regulação pós-transcricional IRP/IRE e faz interface com respostas ao estresse oxidativo por meio da química redox catalisada por ferro. A desregulação da disponibilidade de transferrina ou da expressão de TF está associada a alterações na distribuição sistêmica de ferro, na sinalização inflamatória e em estados de sobrecarga ou restrição de ferro que influenciam a hematopoiese e o metabolismo tecidual. Assim, TF é amplamente estudado em sensoriamento de nutrientes, na susceptibilidade à peroxidação lipídica adjacente à ferroptose e na dinâmica do ferro no microambiente tumoral em modelos de biologia celular e molecular.

transferrin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

transferrin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de transferrin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de transferrin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via transferrin em células tumorais com expressão de TF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.