Transaldolase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402807-ACT

O TALDO1 humano codifica a transaldolase, uma enzima-chave do ramo não oxidativo da via das pentoses fosfato, que interconverte fosfatos de açúcar para equilibrar a produção de ribose-5-fosfato com intermediários da glicólise. Por meio dessa função, o TALDO1 sustenta a biossíntese de nucleotídeos, a homeostase redox indiretamente via o fluxo da via e a adaptação celular ao estresse oxidativo e metabólico. Alterações na atividade da transaldolase têm sido associadas a erros inatos do metabolismo e a perturbações mais amplas da função hepatocelular, da regulação imune e de vias de dano oxidativo. Como um nó metabólico, o TALDO1 é frequentemente estudado em contextos em que a reprogramação da via das pentoses fosfato afeta proliferação, diferenciação e respostas ao estresse.

Transaldolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TALDO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Transaldolase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TALDO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TALDO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Transaldolase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TALDO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Transaldolase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Transaldolase em células tumorais com expressão de TALDO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.