Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF6 (m): sc-423497

Présentation

Le gène murin Traf6 code TRAF6, une ligase E3 de l’ubiquitine et protéine adaptatrice qui intègre la signalisation en aval des membres de la superfamille des récepteurs du TNF et des récepteurs de type Toll/IL‑1 afin de contrôler les réponses immunitaires innées et adaptatives. TRAF6 catalyse des événements d’ubiquitinylation liés via K63 qui favorisent l’assemblage des complexes TAK1 et IKK, déclenchant la signalisation NF‑κB et MAPK ainsi que des programmes transcriptionnels régulant l’inflammation, la survie cellulaire et la différenciation. Elle est également centrale dans la signalisation RANK/RANKL lors de l’ostéoclastogenèse et contribue à la régulation de l’autophagie via un échafaudage dépendant de l’ubiquitine. Une signalisation TRAF6 dérégulée a été impliquée dans des pathologies inflammatoires, des défauts de remodelage osseux et des contextes de signalisation oncogénique où l’activation de NF‑κB/MAPK et le remodelage des voies de l’ubiquitine sont marqués.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Traf6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Traf6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Traf6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAF6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Traf6 pour l'étude de la signalisation de TRAF6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Traf6 essentiels à la fonction de TRAF6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Traf6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRAF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRAF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Traf6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRAF6 plasmide HDR (m) et le TRAF6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Traf6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Traf6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.