TRAF3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400473-ACT

TRAF3 (TNF-Rezeptor-assoziierter Faktor 3) ist ein zytoplasmatischer Adapter und eine E3-Ubiquitin-Ligase, die Signale von Mitgliedern der TNF-Rezeptor-Superfamilie, Toll-like-Rezeptoren und RIG-I-ähnlichen Rezeptoren an nachgeschaltete entzündliche und antivirale Programme koppelt. Es moduliert zentrale Signalknoten, die die Induktion von Typ-I-Interferonen sowie die Signalstärke der NF-κB- und MAPK-Wege steuern, indem es die ubiquitinabhängige Assemblierung rezeptornaher Komplexe reguliert. In Immunzellen trägt TRAF3 dazu bei, angeborene und adaptive Antworten auszubalancieren, und beeinflusst dabei die B‑Zell-Homöostase, die Zytokinproduktion und die Pathogenerkennung. Eine veränderte TRAF3-Aktivität oder -Expression wird mit Immunfehlregulation und entzündungsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext onkogener Signalgebung und der Biologie hämatologischer Malignome untersucht.

TRAF3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRAF3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRAF3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRAF3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRAF3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRAF3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRAF3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRAF3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRAF3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRAF3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.