TR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423490

Übersicht

Nr2c2 kodiert den verwaisten nukleären Rezeptor TR4 (testicular receptor 4), einen ligandunabhängigen Transkriptionsfaktor, der an Hormon-Response-Elemente bindet und dadurch Genprogramme reguliert, die an Entwicklung, Stoffwechsel und Zellschicksalsentscheidungen beteiligt sind. In Mausmodellen ist TR4 in nukleäre Rezeptor-Signalnetzwerke eingebunden und beeinflusst die transkriptionelle Kontrolle der Lipid- und Glukosehomöostase, der Mitochondrienfunktion sowie von Differenzierungsprozessen in reproduktiven, neuronalen und immunbezogenen Kontexten. Die TR4-Aktivität wurde über breit angelegte transkriptionelle Effekte mit der Modulation inflammatorischer Signalwege und zellulärer Stressantworten in Verbindung gebracht, wodurch Nr2c2 einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Pathway-Crosstalk darstellt. Eine Fehlregulation TR4-assoziierter Genexpression wurde in Modellen für Stoffwechselstörungen, Neurobiologie und onkogene Phänotypen untersucht, was seine Relevanz für mechanistische Forschung unterstreicht, ohne klinische Ergebnisse zu implizieren.

Das TR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nr2c2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nr2c2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nr2c2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TR4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nr2c2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TR4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nr2c2-Exone abzielen, die für die TR4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nr2c2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nr2c2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TR4 HDR-Plasmid (m) und TR4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nr2c2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nr2c2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.