Plasmide CRISPR d'Activation (h) TR2: sc-403818-ACT

Le gène humain NR2C1 code TR2, un récepteur nucléaire orphelin qui agit comme facteur de transcription spécifique de séquence et régule des programmes d’expression génique liés au destin cellulaire, au métabolisme et à la signalisation endocrine. TR2 se fixe sur des éléments de réponse des récepteurs nucléaires et interagit avec des corégulateurs afin de moduler des réseaux transcriptionnels impliqués dans la différenciation, la biologie de la reproduction et les processus de développement. Dans les voies cellulaires, l’activité de TR2 peut influencer l’état de la chromatine et l’homéostasie transcriptionnelle, orientant les choix de lignée et l’expression de gènes sensibles au stress. Une expression ou une signalisation dérégulée de NR2C1/TR2 a été associée dans la littérature à des états de différenciation altérés et à des programmes transcriptionnels pertinents pour le cancer, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de régulation génique.

TR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR2C1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR2C1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR2C1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR2C1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NR2C1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.