TPPP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405113-ACT

TPPP3 (membro 3 da família de proteínas promotoras da polimerização da tubulina) é uma proteína associada a microtúbulos, implicada na organização e na dinâmica do citoesqueleto, influenciando processos como a forma celular, o transporte intracelular e a progressão do ciclo celular. Ao modular a polimerização da tubulina e a estabilidade dos microtúbulos, a TPPP3 pode afetar vias ligadas à diferenciação epitelial, à motilidade e às respostas ao estresse. Alterações na expressão de TPPP3 foram relatadas em múltiplos contextos de doença, incluindo carcinomas, nos quais mudanças na regulação do citoesqueleto se correlacionam com fenótipos de invasão e proliferação. Essas propriedades tornam a TPPP3 um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização dependente de microtúbulos e de plasticidade fenotípica em células humanas.

TPPP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TPPP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TPPP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TPPP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TPPP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TPPP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TPPP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TPPP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TPPP3 em células tumorais com expressão de TPPP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.