Plásmido CRISPR de Activación (h) TPPP3: sc-405113-ACT

TPPP3 (miembro 3 de la familia de proteínas promotoras de la polimerización de tubulina) es una proteína asociada a microtúbulos implicada en la organización y la dinámica del citoesqueleto, e influye en procesos como la forma celular, el transporte intracelular y la progresión del ciclo celular. Al modular la polimerización de la tubulina y la estabilidad de los microtúbulos, TPPP3 puede afectar vías relacionadas con la diferenciación epitelial, la motilidad y las respuestas al estrés. Se han descrito alteraciones en la expresión de TPPP3 en múltiples contextos patológicos, incluidos carcinomas, donde los cambios en la regulación del citoesqueleto se correlacionan con fenotipos de invasión y proliferación. Estas propiedades convierten a TPPP3 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la señalización dependiente de microtúbulos y de la plasticidad fenotípica en células humanas.

TPPP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TPPP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TPPP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TPPP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TPPP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TPPP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TPPP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TPPP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TPPP3 en células tumorales con expresión de TPPP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.