TorsinB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407379

Descripción general

TOR1B codifica TorsinB, una ATPasa AAA+ localizada en el retículo endoplásmico y en el espacio perinuclear, que contribuye al control de calidad de proteínas y al mantenimiento de la arquitectura de la envoltura nuclear. TorsinB participa en procesos vinculados a la homeostasis del RE, la remodelación de membranas y la regulación de la biogénesis del complejo del poro nuclear, a menudo con solapamiento funcional con otros miembros de la familia de las torsinas. La alteración de las vías mediadas por torsinas puede perturbar el acoplamiento núcleo-citoesquelético y las respuestas celulares al estrés, lo que hace que TOR1B sea relevante para estudios de la función neuronal y la biología de los trastornos del movimiento. Como gen humano con funciones en la interfaz RE–envoltura nuclear, TOR1B se investiga con frecuencia en modelos que examinan la proteostasis, la mecanotransducción y la integridad de los orgánulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TorsinB (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TOR1B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TOR1B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TOR1B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TorsinB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TOR1B para la investigación de la señalización de TorsinB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TOR1B críticos para la función de TorsinB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TOR1B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TorsinB CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TorsinB CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TOR1B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TorsinB (h) y el plásmido HDR TorsinB (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TOR1B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TOR1B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.