Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406840

Übersicht

TOP3B kodiert die DNA-Topoisomerase III beta (Topo IIIβ), eine ATP-unabhängige Topoisomerase des Typs IA, die topologischen Stress durch vorübergehendes Schneiden und Wiederverknüpfen einzelsträngiger Nukleinsäuren auflöst. Topo IIIβ wirkt in Signal- und Reparaturwegen zur Genomstabilität, die Replikation und Transkription absichern, und kooperiert mit Helikasen und Scaffold-Partnern, um die Anreicherung von R-Loops und anderen aberranten Nukleinsäurestrukturen zu begrenzen. Durch diese Aktivitäten trägt TOP3B zur Erhaltung der DNA-Integrität bei und unterstützt einen korrekten RNA-Stoffwechsel, wodurch die Topoisomeraseaktivität sowohl mit nukleären als auch zytoplasmatischen Prozessen verknüpft wird. Eine genetische Störung oder veränderte Regulation von TOP3B wurde mit Phänotypen der Genominstabilität in Verbindung gebracht und im Kontext einer Anfälligkeit für neuroentwicklungsbedingte und psychiatrische Erkrankungen untersucht.

Das Topo IIIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TOP3B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TOP3B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TOP3B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Topo IIIβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TOP3B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Topo IIIβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TOP3B-Exone abzielen, die für die Topo IIIβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TOP3B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Topo IIIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Topo IIIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TOP3B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Topo IIIβ HDR-Plasmid (h) und Topo IIIβ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TOP3B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TOP3B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.