Plásmido Doble Nickase (h) TNF-R1: sc-400206-NIC

TNFRSF1A codifica TNF-R1, un receptor expresado de forma ubicua que se une a TNF-α para iniciar la transducción de señales que regulan la inflamación, la supervivencia celular y la muerte celular programada. La unión del ligando favorece el ensamblaje de complejos asociados al receptor que pueden activar las vías canónicas de NF-κB y MAPK para inducir programas génicos de citocinas y respuesta al estrés, o bien inclinarse hacia la apoptosis y la necroptosis dependientes de caspasas bajo contextos regulatorios específicos. A través de estas bifurcaciones de señalización, TNF-R1 influye en la activación de la inmunidad innata, la homeostasis tisular y las respuestas de barrera endotelial y epitelial. La señalización desregulada de TNFRSF1A y las variantes que afectan la función del receptor se han vinculado con fenotipos autoinflamatorios y con mecanismos más amplios de enfermedades inflamatorias, lo que lo convierte en un objetivo frecuente para analizar el comportamiento de redes impulsadas por TNF.

TNF-R1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNFRSF1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNFRSF1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNFRSF1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNFRSF1A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.