TMEM70 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412399

Descripción general

TMEM70 codifica una proteína de la membrana interna mitocondrial necesaria para el ensamblaje y la estabilización adecuados del complejo V de la fosforilación oxidativa (ATP sintasa), lo que favorece una producción eficiente de ATP y la homeostasis energética mitocondrial. La pérdida o disfunción de TMEM70 altera la síntesis de ATP acoplada a protones, lo que a menudo conduce a cambios en el potencial de membrana mitocondrial, a una disrupción de la función de la cadena respiratoria y a una remodelación metabólica compensatoria. Por ello, TMEM70 es un punto de referencia útil para estudiar la biogénesis mitocondrial, la bioenergética y la coordinación mito‑nuclear en células humanas. Se han vinculado variantes patógenas de TMEM70 con enfermedades mitocondriales autosómicas recesivas, incluida la deficiencia del complejo V con fenotipos de encefalocardiomiopatía y descompensación metabólica, lo que impulsa estudios mecanísticos en modelos celulares relevantes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TMEM70 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TMEM70 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TMEM70 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TMEM70 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TMEM70.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TMEM70 para la investigación de la señalización de TMEM70, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TMEM70 críticos para la función de TMEM70
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TMEM70 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TMEM70 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TMEM70 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TMEM70. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TMEM70 (h) y el plásmido HDR TMEM70 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TMEM70 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TMEM70 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.