TMEM191B Lentiviral Activation Particles (h2): sc-417493-LAC-2

Das humane Gen TMEM191B kodiert das Transmembranprotein 191B, ein vorhergesagtes Multi-Pass-Membranprotein, das wahrscheinlich in intrazellulären oder Plasmamembran-Kompartimenten lokalisiert ist und zur Organisation von Membranen sowie zum Proteintransport beiträgt. Obwohl TMEM191B bislang nur unzureichend charakterisiert ist, deuten neuere Annotationen und Expressionsmuster auf Funktionen bei der Regulation des vesikulären Transports, der Endomembran-Dynamik und von zellulären Signalprozessen hin, die von der Zusammensetzung membranaler Mikrodomänen abhängen. Eine veränderte Regulation membranassoziierter Transport- und Signalnetzwerke wird häufig mit Krebs sowie neuroentwicklungsbedingten oder neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch TMEM191B ein nützliches Ziel ist, um die Empfindlichkeit von Signalwegen gegenüber Störungen der Dosierung von Membranproteinen zu untersuchen. Gen-Editing von TMEM191B ermöglicht Loss-of-Function- oder Tagging-Studien, um die subzelluläre Lokalisation zu kartieren, Interaktionspartner zu identifizieren und seinen Beitrag zur zellulären Homöostase in humanen Zellmodellen zu definieren.

TMEM191B Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TMEM191B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TMEM191B Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TMEM191B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TMEM191B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TMEM191B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.