TMEM175 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413613

Übersicht

TMEM175 kodiert einen transmembranären Kanal in Lysosomen und späten Endosomen, der zur Ionenhomöostase der Organellen und zur Stabilität des luminalen pH-Werts beiträgt. Durch die Regulation der lysosomalen Funktion beeinflusst TMEM175 den autophagischen Flux, den endolysosomalen Transport sowie Proteostase‑Signalwege, die den Abbau von Proteinen und geschädigten Organellen steuern. Eine veränderte TMEM175‑Aktivität wird mit einer gestörten lysosomenabhängigen Clearance und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, was dieses Gen mit für Neurodegeneration relevanten Mechanismen verknüpft. TMEM175 wird daher im Kontext der Lysosomenbiologie, des Crosstalks zur mitochondrialen Qualitätskontrolle und von Signalwegen untersucht, die entzündliche und metabolische Anpassungsprozesse modulieren.

Das TMEM175 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMEM175-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMEM175-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMEM175 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TMEM175-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMEM175-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TMEM175-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMEM175-Exone abzielen, die für die TMEM175-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMEM175-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TMEM175 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TMEM175 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMEM175-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TMEM175 HDR-Plasmid (h) und TMEM175 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMEM175-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMEM175-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.