Partículas Lentivirales de Activación (h) TMEM125: sc-414318-LAC

TMEM125 codifica una proteína transmembrana multipaso con una anotación funcional limitada, que se ha descrito que se localiza en membranas intracelulares y se ha implicado en la regulación del tráfico vesicular y de la señalización asociada a membrana. Como presunto organizador de membranas, TMEM125 se estudia en el contexto de la homeostasis de orgánulos, la clasificación de proteínas y las respuestas al estrés celular que influyen en la proliferación y la supervivencia. La expresión alterada de reguladores transmembrana como TMEM125 se explora con frecuencia en conjuntos de datos transcriptómicos para identificar asociaciones con vías oncogénicas, señalización inmunitaria y adaptación metabólica. Estas características hacen de TMEM125 una diana útil para estudios mecanísticos que vinculan la dinámica de membranas con la modulación de vías y fenotipos relevantes para la enfermedad en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM125 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM125 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM125 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM125, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM125. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM125 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.