Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM119: sc-404363-ACT

TMEM119 code une protéine transmembranaire de type I, enrichie dans la microglie et dans d’autres contextes de la lignée myéloïde, où elle est largement utilisée comme marqueur de l’identité microgliale et de l’état de maturation. Bien que ses rôles mécanistiques soient encore en cours d’élucidation, l’expression de TMEM119 suit des programmes qui façonnent la surveillance immunitaire, l’homéostasie cellulaire et la signalisation inflammatoire dans le système nerveux central. Des états microgliaux TMEM119-positifs altérés ont été associés à des cadres de recherche sur les maladies neuro-inflammatoires et neurodégénératives, notamment dans des études portant sur l’activation de la microglie, le remodelage tissulaire et les interactions avec les neurones et les astrocytes. En tant que protéine associée à la membrane, TMEM119 est également pertinente pour l’étude des réseaux régulateurs liés à la surface cellulaire et du contrôle transcriptionnel spécifique de lignée.

TMEM119 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM119 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM119 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM119 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM119, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM119. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM119 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM119 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM119 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM119 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.