TLR8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431303
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- TLR8 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im TLR8-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TLR8: sc-373760
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TLR8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-431303 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Tlr8 kodiert den Toll-like-Rezeptor 8 (TLR8), einen endosomalen Mustererkennungsrezeptor, der pathogenabgeleitete einzelsträngige RNA sowie ausgewählte synthetische Agonisten erkennt und dadurch angeborene Immun-Signalwege aktiviert. Nach Aktivierung stößt TLR8 MYD88-abhängige Signalkaskaden an, die auf die NF-κB- und MAPK-Wege zusammenlaufen und Transkriptionsprogramme für entzündliche Zytokine und kostimulatorische Mediatoren fördern, welche myeloide und lymphoide Antworten mitprägen. In der Maus trägt TLR8 zur Regulation des Zytokingleichgewichts und zum Crosstalk zwischen endosomalen Nukleinsäure-sensierenden Rezeptoren bei und beeinflusst damit die Antigenpräsentation und die nachgeschaltete adaptive Immunität. Eine fehlregulierte TLR8-assoziierte Signalübertragung wurde mit entzündlichen Phänotypen und einer veränderten Wirtsabwehr in Verbindung gebracht und ist daher relevant für Studien zur Infektionsbiologie, zu Autoimmunitätsmechanismen und zu immunmetabolischem Stress.
Das TLR8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tlr8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tlr8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tlr8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TLR8-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tlr8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TLR8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Tlr8-Exone abzielen, die für die TLR8-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tlr8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom TLR8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TLR8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tlr8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TLR8 HDR-Plasmid (m) und TLR8 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tlr8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tlr8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.