TLR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431302

Übersicht

Tlr7 kodiert den Toll-like-Rezeptor 7 (TLR7), einen endosomalen Mustererkennungsrezeptor, der einzelsträngige RNA sowie synthetische Imidazoquinolin-Liganden erkennt und dadurch die angeborene Immunantwort initiiert. Nach der Aktivierung koppelt TLR7 an MYD88 und aktiviert die IRAK–TRAF6-Signalkaskade, die eine NF-κB- und IRF7-abhängige Transkription von Typ-I-Interferonen und proinflammatorischen Zytokinen auslöst und so antivirale Abwehrmechanismen und B‑Zell-Antworten prägt. Bei Mäusen beeinflusst die TLR7-Aktivität die Aktivierung dendritischer Zellen, die Dynamik der Keimzentren und Zytokinmilieus, die die adaptive Immunität koordinieren. Eine fehlregulierte TLR7-Signalübertragung wird mit entzündlichen und autoimmunen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen der systemischen Immunaktivierung und der Pathogenerkennung untersucht.

Das TLR7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tlr7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tlr7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tlr7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TLR7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tlr7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TLR7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tlr7-Exone abzielen, die für die TLR7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tlr7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TLR7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TLR7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tlr7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TLR7 HDR-Plasmid (m) und TLR7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tlr7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tlr7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.