Plásmido CRISPR de Activación (h) TLR5: sc-401154-ACT

El TLR5 humano codifica el receptor tipo Toll 5, un receptor de reconocimiento de patrones que detecta la flagelina bacteriana e inicia la señalización inmunitaria innata en la membrana plasmática. Tras la unión del ligando, TLR5 señala principalmente a través del eje dependiente de MYD88 para activar las vías de NF-κB y MAPK, promoviendo la transcripción de citocinas y quimiocinas proinflamatorias que moldean las respuestas inmunitarias mucosas y sistémicas. La actividad de TLR5 influye en la función de la barrera epitelial y en las interacciones huésped–microbioma, y la señalización alterada se ha vinculado a fenotipos inflamatorios y a la susceptibilidad a infecciones. Debido a su papel central en el reconocimiento de patógenos y en el tono inmunitario, TLR5 se estudia con frecuencia en inmunología, microbiología y modelos celulares centrados en la inflamación.

TLR5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TLR5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TLR5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TLR5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TLR5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TLR5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TLR5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TLR5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TLR5 en células tumorales con expresión de TLR5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.