TLR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (bovine): sc-437333

Übersicht

Der Toll-like-Rezeptor 4 (TLR4) ist ein Mustererkennungsrezeptor, der Lipopolysaccharid und weitere pathogen- bzw. schädigungsassoziierte Liganden erkennt und dadurch die angeborene Immunantwort in bovinen myeloiden und epithelialen Zellen auslöst. Die Ligandenbindung aktiviert MyD88- und TRIF-abhängige Signalwege und schaltet transkriptionelle Programme von NF-κB und IRF an, die proinflammatorische Zytokine, Chemokine und Typ-I-Interferonantworten regulieren. Die TLR4-Signalgebung greift zudem in MAPK-Kaskaden ein und trägt zur Priming-Phase des Inflammasoms bei, wodurch die Rekrutierung von Leukozyten und das Entzündungsniveau im Gewebe mitgeprägt werden. Eine fehlregulierte TLR4-Aktivität wird mit bovinen entzündlichen und infektiösen Krankheitsphänotypen in Verbindung gebracht, darunter Mastitis und endotoxinvermittelte systemische Reaktionen, und ist daher relevant für die Untersuchung von Wirt–Pathogen-Interaktionen und der Immunhomöostase.

Das TLR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (bovine) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des -Gens in bovine-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des -Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TLR4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von -defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TLR4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf -Exone abzielen, die für die TLR4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere -Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TLR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (bovine) und vom TLR4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (bovine2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des -Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TLR4 HDR-Plasmid (bovine) und TLR4 HDR-Plasmid (bovine2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von -Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten -Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.