TLE4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401215-ACT

TLE4 (transducin-like enhancer of split 4) ist ein transkriptioneller Korepressor der Groucho/TLE-Familie, der Genexpressionsprogramme reguliert, welche Zellschicksalsentscheidungen, Differenzierung und Linienfestlegung steuern. Durch die Bindung an DNA-assoziierte Transkriptionsfaktoren und die Rekrutierung chromatinmodifizierender Komplexe unterstützt TLE4 die Transkriptionsrepression in verschiedenen Entwicklungswegen, darunter Wnt/β-Catenin- und Notch-assoziierte Gennetzwerke. In hämatopoetischen und neuronalen Kontexten hilft TLE4, Reifungszustand sowie Selbsterneuerung versus Differenzierung zu koordinieren, und ist damit mit Mechanismen verknüpft, die bei Fehlregulation onkogene Transkriptionsprogramme beeinflussen können. Eine veränderte TLE4-Expression oder -Funktion wurde mit malignitätsbezogenem epigenetischem und transkriptionellem Rewiring in Verbindung gebracht, was TLE4 für die Untersuchung kontextabhängiger Tumorbiologie und entwicklungsbedingter Genregulation relevant macht.

TLE4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TLE4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TLE4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TLE4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TLE4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TLE4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TLE4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TLE4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TLE4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TLE4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.