TIS11D Lentiviral Activation Particles (h): sc-405406-LAC

ZFP36L2 kodiert das RNA-bindende Protein TIS11D, ein Mitglied der Tristetraprolin-Familie, das AU-reiche Elemente in Ziel-mRNAs erkennt und die Deadenylierung sowie den Abbau der Transkripte fördert. Durch posttranskriptionelle Kontrolle von Zytokinen, Transkriptionsfaktoren und Zellzyklusregulatoren trägt TIS11D dazu bei, Signalausgänge nach Immunaktivierung und in Differenzierungsprogrammen zu formen, einschließlich Signalwegen, die mit NF-κB-abhängiger Entzündung und der Lymphozytenentwicklung verknüpft sind. Eine dysregulierte ZFP36L2-Aktivität wurde mit einer veränderten hämatopoetischen und T‑Zell-Homöostase in Verbindung gebracht und in Kontexten von Immundysfunktion und Krebsbiologie untersucht, in denen die mRNA-Stabilität Proliferation und Linienfestlegung beeinflusst.

TIS11D Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ZFP36L2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TIS11D Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ZFP36L2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TIS11D-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ZFP36L2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.