Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIS11D: sc-405406-ACT

ZFP36L2 code pour la protéine humaine de liaison à l’ARN TIS11D, membre de la famille tristetraprolin, qui reconnaît des éléments riches en AU dans les ARNm cibles et favorise la désadénylation et la dégradation des transcrits. Par un contrôle post‑transcriptionnel, TIS11D module des programmes impliqués dans le développement des lymphocytes, l’activation cellulaire et la différenciation, en s’intégrant à des réseaux de signalisation inflammatoires et sensibles au stress afin de façonner la dynamique de l’expression génique. Une activité altérée de ZFP36L2 a été associée à une homéostasie immunitaire dérégulée et à une prolifération aberrante, via une mauvaise gestion de transcrits liés aux cytokines et au cycle cellulaire, ce qui souligne sa pertinence pour la recherche en immunologie et en maladies hématologiques. En tant que régulateur de la stabilité des ARNm, TIS11D constitue un point d’entrée exploitable pour étudier le turnover de l’ARN, le remodelage du transcriptome et l’engagement de lignée.

TIS11D Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZFP36L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIS11D Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZFP36L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZFP36L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIS11D. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZFP36L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIS11D au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIS11D dans les cellules tumorales présentant une expression de ZFP36L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.