TIP60 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400810-ACT

KAT5 codifica TIP60 (KAT5), uma acetiltransferase de histonas da família MYST que acetila histonas e substratos não histônicos para regular a acessibilidade da cromatina, programas transcricionais e a estabilidade do genoma. TIP60 atua em complexos multiproteicos que coordenam a sinalização e o reparo de quebras de dupla fita do DNA, incluindo respostas dependentes de ATM, e modula checkpoints do ciclo celular, apoptose e vias de estresse replicativo. Por meio de suas funções no controle epigenético e na resposta a danos no DNA, alterações na atividade de TIP60 têm sido associadas a redes transcricionais desreguladas e instabilidade genômica observadas em múltiplos contextos relacionados ao câncer e à neurodegeneração.

TIP60 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KAT5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIP60 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KAT5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KAT5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIP60. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KAT5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIP60 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIP60 em células tumorais com expressão de KAT5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.